Dithiothreitol (DTT) ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್, ಇದನ್ನು ಹೊಸ ಹಸಿರು ಸಂಯೋಜಕ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದು ಎರಡು ಮೆರ್ಕಾಪ್ಟಾನ್ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ (-SH) ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಆಣ್ವಿಕ ಸಾವಯವ ಸಂಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಅದರ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಡಿಟಿಟಿಯನ್ನು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಡಿಟಿಟಿಯ ಮುಖ್ಯ ಪಾತ್ರವು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು.ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಫೋಲ್ಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯ ಪ್ರಮುಖ ಭಾಗವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಕೆಲವು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಬಹುದಾದ SDS-PAGE ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮರುಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಮಡಿಸುವಿಕೆ, ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರಚನೆಯನ್ನು ಬಿಚ್ಚಿಡಲು ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಎರಡು ಥಿಯೋಲ್ ಗುಂಪುಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು ಅವಶ್ಯಕ. ಪ್ರೋಟೀನ್.ಡಿಟಿಟಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಮರ್ಕ್ಯಾಪ್ಟಾನ್ ಗುಂಪುಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಹೀಗಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರಚನೆಯನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಮತ್ತು ಕುಶಲತೆಯಿಂದ ಸುಲಭವಾಗುತ್ತದೆ.
ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ರಕ್ಷಿಸಲು ಡಿಟಿಟಿಯನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು.ಕೆಲವು ಕಿಣ್ವ-ವೇಗವರ್ಧಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ, ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಆಕ್ಸಿಡೆಂಟ್‌ನಿಂದ ಕಡಿಮೆಯಾಗಬಹುದು.ಡಿಟಿಟಿಯು ಆಕ್ಸಿಡೆಂಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಿ ಅವುಗಳನ್ನು ನಿರುಪದ್ರವ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಗೆ ತಗ್ಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.
ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಾದ β-ಮರ್ಕ್ಯಾಪ್ಟೊಎಥೆನಾಲ್ (β-ME) ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, DTT ಅನ್ನು ಸುರಕ್ಷಿತ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರವಾದ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದು ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಆಮ್ಲ-ಬೇಸ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅದರ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಸಹ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.
ಡಿಟಿಟಿಯ ಬಳಕೆ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸರಳವಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಡಿಟಿಟಿಯನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾದ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರಯೋಗದ ಪ್ರಕಾರ DTT ಯ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 0.1-1mM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಒತ್ತಡದಿಂದಾಗಿ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅತಿಯಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಚಯಾಪಚಯ ಹೊರೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.
ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ IPTG ಇಂಡಕ್ಷನ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸುವ ಮೂಲಕ ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಸೂಕ್ತ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ.ಸಣ್ಣ-ಪ್ರಮಾಣದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು IPTG ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು (ಉದಾ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ಇತ್ಯಾದಿ.) ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವ ಮೂಲಕ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬಹುದು (ಉದಾ. ಪಾಶ್ಚಿಮಾತ್ಯ). ಬ್ಲಾಟ್ ಅಥವಾ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಪತ್ತೆ).ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯಾಗಿ ಆಯ್ಕೆಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಇದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ IPTG ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಶ್ರೇಣಿಯನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ನೀವು ಸಂಬಂಧಿತ ಸಾಹಿತ್ಯ ಅಥವಾ ಇತರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳ ಅನುಭವವನ್ನು ಸಹ ಉಲ್ಲೇಖಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಹೊಂದಿಸಬಹುದು.
ವಿಭಿನ್ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು, ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಬದಲಾಗಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕೇಸ್-ಬೈ-ಕೇಸ್ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸುವುದು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.
ಸಾರಾಂಶದಲ್ಲಿ, ಡಿಟಿಟಿಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ರಕ್ಷಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು.ಇದನ್ನು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಸೆಪ್ಟೆಂಬರ್-28-2023